RESUMO O presente estudo testou um ensaio cometa modificado para a coloração de Giemsa para avaliar a genotoxicidade de fármacos no sangue periférico de ratos. Analisou-se o sangue periférico de 16 ratas Wistar (n=8 ratas/grupo) de um grupo controle e de um grupo que foi tratado com uma injeção intraperitoneal de 50mg/kg pv. de ciclofosfamida. O ensaio cometa foi realizado com modificações do volume sanguíneo e do tempo de imersão na solução de lise, bem como com diferentes combinações de condições de eletroforese (tempo de corrida, tensão e corrente), para coloração de Giemsa. O tempo de lise e as condições de eletroforese permitiram a expressão de todas as classes de danos no DNA durante a corrida de eletroforese, e os cometas foram eficientemente corados com Giemsa. A técnica mostrou alta reprodutibilidade para as classes de DNA. Os resultados demonstram que o ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa foi padronizado para procedimentos laboratoriais de rotina usando-se uma amostra de sangue de 20µL, 3h30min de imersão na solução de lise e eletroforese com 23 a 25 V e 310 e 360mA. O ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa descrito foi padronizado para ser aplicado na rotina laboratorial.

ABSTRACT The present study tested a comet assay that was modified for compatibility with Giemsa staining to assess the drug genotoxicity in the peripheral blood of rats. We analysed the peripheral blood of 16 female Wistar rats (N=8 rats/group) from a control group and from a group that was treated with an intraperitoneal injection of 50mg cyclophosphamide/kg. The comet assay was carried out with modifications of the blood volume and immersion time in the lysing solution and different combinations of electrophoresis conditions (running time, voltage and current), to Giemsa staining. The lysing time and electrophoresis conditions allowed for the expression of all classes of DNA damage during the electrophoresis run, and the comets were efficiently stained with Giemsa. The technique showed high reproducibility for the DNA classes. The results demonstrate that the modified comet assay with Giemsa staining can be standardized for routine laboratory procedures using a 20µL blood sample, 3h and 30min immersions in the lysing solution and electrophoresis runs with 23 to 25 V and 310 and 360mA of electrical current. The modified comet assay with Giemsa staining that was described in the present study was standardized to be applied in the laboratory routine.

RESUMO Este estudo avaliou a integridade da membrana plasmática, da membrana acrossomal e o potencial da membrana mitocondrial de espermatozoides de touros da raça Nelore da puberdade até à maturidade sexual e suas correlações com motilidade, vigor, turbilhão dos espermatozoides, circunferência escrotal e testosterona. Sessenta touros da raça Nelore, com idade entre 18 e 19 meses, foram divididos em quatro lotes (n=15 touros / lote) e foram avaliados por 280 dias. Coletaram-se as amostras de sêmen a cada 56 dias por eletroejaculação e, logo após, foram determinados a motilidade, o vigor e o turbilhão dos espermatozoides por microscopia óptica. A integridade da membrana de esperma, da membrana acrosomal e da atividade mitocondrial foi avaliada por microscopia de fluorescência, utilizando-se associação das sondas (FITC-PSA, PI, JC-1, H342). Os espermatozoides foram classificados em oito categorias de integridade, dependendo se eles exibiram membranas plasmática e mitocondrial intactas ou danificadas e potencial mitocondrial elevado ou baixo. Os resultados mostram que os touros têm uma baixa quantidade de espermatozoides com membranas íntegras na puberdade, com baixa motilidade, vigor e turbilhão. No entanto, nos touros na maturidade sexual precoce, a integridade da membrana dos espermatozoides aumentou significativamente. A taxa de dano à membrana espermática foi negativamente correlacionada com a motilidade, o vigor, o movimento das ondas e a concentração de testosterona nos touros, e uma correlação positiva existiu entre a integridade da membrana plasmática e a circunferência escrotal. A integridade da membrana acrossomal não foi influenciada pela puberdade.

ABSTRACT This study evaluated the plasma membrane integrity, acrosomal membrane integrity, and mitochondrial membrane potential of Nelore bull sperm from early puberty to early sexual maturity and their associations with sperm motility and vigor, the mass motility of the spermatozoa (wave motion), scrotal circumference, and testosterone. Sixty Nelore bulls aged 18 to 19 months were divided into four lots (n=15 bulls/lot) and evaluated over 280 days. Semen samples, collected every 56 days by electroejaculation, were evaluated soon after collection for motility, vigor and wave motion under an optical microscope. Sperm membrane integrity, acrosomal integrity, and mitochondrial activity were evaluated under a fluorescent microscope using probe association (FITC-PSA, PI, JC-1, H342). The sperm were classified into eight integrity categories depending on whether they exhibited intact or damaged membranes, an intact or damaged acrosomal membrane, and high or low mitochondrial potential. The results show that bulls have a low amount of sperm with intact membranes at puberty, and the sperm show low motility, vigor, and wave motion; however, in bulls at early sexual maturity, the integrity of the sperm membrane increased significantly. The rate of sperm membrane damage was negatively correlated with motility, vigor, wave motion, and testosterone in the bulls, and a positive correlation existed between sperm plasma membrane integrity and scrotal circumference. The integrity of the acrosomal membrane was not influenced by puberty. During puberty and into early sexual maturity, bulls show low sperm mitochondrial potential, but when bulls reached sexual maturity, high membrane integrity with high mitochondrial potential was evident.

This study evaluated the relationship between Se supplementation and serum cortisol in repeatedly handled cattle. Sixty Nellore calves were randomly distributed into four experimental groups, which were fed a mineral-protein mixture added with Se to achieve individual daily supplementation of 0 (Gc), 3.6 (G3.6), 5.4 (G5.4) and 6.4 (G6.4) mg Se. Stressful handling procedures and blood sampling were performed on days 0, 15, 30, 60, 90 and 120. Serum cortisol increased until day 90 and decreased on day 120, irrespective of Se supplementation. This finding shows that cattle reached a stress state but adapted. Cortisol and Se levels were not markedly correlated. Serum Se increased over the course of the experiment in the supplemented groups. However, because serum Se decreased in Gc, it may have mobilized to form the selenoproteins needed to remove metabolic wastes from handling-related oxidative stress.

Este estudo avaliou a relação entre suplementação com Se e cortisol sérico em gado manejado repetidamente. Sessenta bezerros Nelore foram distribuídos em quatro grupos, os quais se alimentaram de uma mistura mineral protéica acrescida de Se de modo a alcançar suplementação individual diária de 0 (Gc), 3.6 (G3.6), 5.4 (G5.4) or 6.4 (G6.4) mg Se. O estresse de manejo e as colheitas das amostras de sangue foram nos dias 0, 15, 30, 60, 90 e 120. O cortisol sérico aumentou até o dia 90 e reduziu no dia 120, independente da suplementação com Se. Isso indica que os bovinos ficaram estressados, mas se adaptaram ao longo do tempo. O cortisol e Se sérico não foram marcantemente correlacionados. A concentração de Se sérico aumentou ao longo do experimento nos grupos suplementados. Entretanto, como o Se sérico foi reduzido em Gc, deve-se considerar que ele pode ter sido mobilizado para formação de selenoproteínas necessárias à remoção dos restos metabólicos resultantes do estresse oxidativo desencadeado pelo estresse de manejo.

This study evaluated the effect of daily chromium supplementation at growing doses on serum Cr levels in cattle. Sixty Nellore heifers 2 to 5 years old were randomly assigned to one of four groups (15 heifers/group) fed non-fertilized Brachiaria decumbens pasture. In the control group (Gc), the heifers received a mineral mixture without Cr. In the other groups, heifers received 0.59, 1.19 or 2.38 mg Cr+3/animal/day, groups G8,5, G17 and G34, respectively. Blood samples were collected on days 0, 30 and 60. Serum concentration of chromium was determined by graphite furnace atomic absorption spectrophotometer. The chromium source used was the chromium yeast. The results do not support any significant difference (p>0.05) among serum chromium levels of heifers in groups Gc, G8,5, G17 and G34 at a same observation day. Only effect of supplementation time was detected in group G34. In this group there was significant increase (p<0,05) in the concentration serum chromium 60 days after the beginning of the experiment. Concluded Cr yeast can be used as the source of this mineral element for animals and supplementation with 2.38 mg/ cattle/day was the dose that most increased the serum concentration of Cr in Nellore cattle during the experimental period.

O estudo avaliou o efeito da suplementação com doses crescentes de crômio/dia sobre a concentração sérica de Cr em bovinos. Sessenta novilhas da raça Nelore com idade entre 2 e 5 anos foram distribuídas aleatoriamente em 4 grupos (15 novilhas/grupo) alimentadas com pastagem de Brachiaria decumbens não fertilizada. No grupo controle (Gc), as novilhas receberam mistura mineral sem adição de Cr. Nos demais as novilhas receberam 0,59; 1,19 e 2,38 mg de Cr+3/animal/dia (grupos G8,5, G17 e G34, respectivamente). Colheramse amostras de sangue nos dias 0, 30 e 60. A concentração sérica de crômio foi determinada por meio de espectrofotometria de absorção atômica com forno de grafite. A fonte de crômio utilizada foi a levedura de crômio. Os resultados mostram que não houve diferença significativa (p>0,05) na concentração sérica de crômio das novilhas entre os grupos G8,5, G17 e G34, num mesmo dia de observação. O único efeito observado foi do tempo de suplementação com crômio no o grupo G34. Neste grupo a concentração sérica de crômio apresentou aumento significativo (p<0,05) 60 dias após o início da suplementação. Conclui-se a levedura de Cr pode ser utilizada como fonte deste elemento mineral para os bovinos e a suplementação com 2,38 mg/bovino/dia foi a dose que mais elevou a concentração sérica de Cr nos bovinos da raça Nelore durante o período experimental.

The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with a dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nellore bovines (N= 75) were divided randomly into 5 groups: supplemented with 0, 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/animal/day, groups Gc, G2, G3, G4 and G8 respectively, for 60 days. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The obtained results showed that there was significant increase (p<0.05) in the titers of antirabies antibodies and frequency of animals immunized in the groups G4 and G8 on 30 and 60. In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine.

Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizou-se bovinos Nelore (N= 75) divididos randomicamente em 5 grupos: suplementados com 0, 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos Gc, G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. Todos os animais foram imunizados com uma de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os resultados obtidos mostraram que houve aumento significativo (p<0,05) nos títulos de anticorpos antirábicos e na freqüência de animais imunizados nos grupos G4 e G8 no dia 30 e 60. Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta immune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rabica.

The study, evaluated the addition of different concentrations of Se in mineral mixture affecting creatine kinase (CK) serum concentrations in cattle. 60 male, Nellore cattle, at about 12 months old, were randomly assigned to groups (15 calves/ group), Gc, G3,6, G5,4 or G6,4 (0, 3.6, 5.4, and 6.4 mg Se/bovine/day). The levels of serum CK in the cattle were not affected by neither the interaction selenium concentration x time nor the concentration of supplementation. However, CK levels increased over the experiment irrespective of dietary selenium concentration. In addition, the frequency of animals with CK levels above normal increased (p<0.10) in group G6,4. The concentrations of selenium studied here do not affect serum CK in cattle, but the daily concentration of 6.4 mg selenium is not recommended because it is possibly toxic effect.

O estudo avaliou os efeitos da adição de diferentes concentrações de Se na mistura mineral sobre concentrações séricas de creatina quinase (CK) em bovinos. 60 bovinos da raça Nelore, machos, com aproximadamente 12 meses de idade, divididos aleatoriamente em 4 grupos de 15 bezerros: Gc, G3,6, G5,4 e G6,4 suplementados com 0; 3,6; 5,4 ou 6,4 mg Se/bovino/dia. A concentração sérica de CK, não sofreu efeito de interação concentração de selênio x tempo, nem concentração de suplementação. Porém, independente da concentração de selênio na dieta, CK aumentou ao longo do tempo e a suplementação com 6,4 mg Se elevou (p<0,10) a freqüência de animais com CK acima da normalidade. A suplementação com selênio nas concentrações estudadas não reduz a concentração sérica de creatina quinase de bovinos, mas a suplementação diária com 6,4 mg não é recomendada por ser possivelmente tóxica.

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do crômio em diferentes concentrações na forma de levedura de crômio na resposta imune humoral anti-rábica em bovinos. Utilizaram-se 60 novilhas da raça Nelore (Bos indicus) com idade média de 2 e 5 anos, alimentadas em pastagem de Brachiaria decumbens, com fornecimento da água de bebida e sal mineral ad libidum, divididas aleatoriamente em 4 grupos de 15: grupo controle (Gc) que receberam o sal mineral sem crômio, os demais grupos receberam sal mineral contendo 8,5, 17 e 34 mg de crômio/kg de sal, grupos G8,5, G17 e G34, respectivamente. Todos os bovinos receberam no dia 0 uma dose de vacina comercial anti-rábica inativada. Colheram-se amostras de sangue nos dias 0, 30, 60 e 90 e os títulos de anticorpos anti-rábicos foram determinados por meio do teste de soroneutralização em camundongos. Os resultados obtidos mostram que as novilhas do grupo G17 apresentaram diferenças significativas no título de anticorpos anti-rábicos, no entanto, somente o G 34 mostrou persistência dos títulos de anticorpos protetores, 90 dias após a vacinação. Os resultados obtidos permitem concluir que o crômio aumentou o título de anticorpos neutralizante anti-rábico e que a melhor concentração estudada foi 34 mg de Cr/kg de sal mineral.

ABSTRACT The effect of chromium yeast on antirabies humoral immune response was evaluated in Nelore heifers. Sixty heifers (Bos indicus) aged about 2 to 5 years were fed on Brachiaria decumbens pasture and allowed ad libitum access to mineral salt and water. They were randomly distributed into one of 4 groups (15 animals each): control animals (Gc) received chromium-free mineral salt; the other groups received 8.5, 17 and 34 mg chromium/salt kg, thus constituting groups G8.5, G17 and G34, respectively. In the first day of the experiment (day 0), all the heifers were vaccinated with commercial rabies vaccines and blood was sampled on days 0, 30, 60 and 90. Antirabies antibody titers were determined by virus neutralization test in mice. Results showed that heifers of G17 increased significantly the antirabies antibody; however, only in G34 was the titer of protective antibodies higher on the 90th day after vaccination. These results demonstrate that chromium increases neutralizing antirabies antibody titers, and that the best concentration is 34 mg Cr/kg mineral salt.